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什么是TR-FRET？ TR-FRET（Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer，时间分辨荧光共振能量转移）是一种用于研究分子间相互作用的生物物理技术。它结合了两种技术： 荧光共振能量转移 (FRET) 和 时间分辨荧光 (TRF，Time-Resolved Fluorescence)。 基因编码传感器：利用基因编码的荧光共振能量转移（FRET）传感器TORCAR来追踪活细胞中的mTORC1活性。 TORCAR作为 mTORC1 的替代底物，当被 mTORC1 磷酸化时，在活细胞中会产生FRET信号，从而实时报告 mTORC1 的活性3。 FRET的程度和两个基团之间的空间距离有关，E=1/1+ (R/R0)exp6，其中R表示基团之间的距离，R0表示福氏半径，依赖荧光基团发射谱和淬灭基团激发谱的重叠程度，以及基团能量转移的偶极子的相对方位。 所以荧光基团的发射光谱要完全覆盖淬灭基团的激发光谱。
FRET首先和距离有关，距离要足够近（一般10nm以下，存在电子离域或者特殊规整简谐的可以长程作用，但并不需要轨道的直接重叠，所以两个发光基团由一段饱和的脂肪烃链链接也不影响）。 其次，FRET与发光基团的荧光效率和吸光基团的吸收效率都正相关。 这个能量转移能够表现为光的变化为我们所观测到。 其实诸如光镊也可以用来测量单分子过程中的距离，但是FRET对3-8nm左右位移最适用，而恰好大量我们关心的位移就在这个范围内。 超出这个范围我可以用光镊，也有FIONA等技术，感兴趣的读者可以自行搜索。 3. 荧光共振能量转移 (FRET)：是一种利用光学原理来研究分子间相互作用的技术。 FRET是指一个分子（发荧分子）的荧光能量被另一个分子（接受分子）吸收，从而使发荧分子的荧光强度降低的现象。 FRET可以用来检测蛋白质和小分子之间的结合。
G-CaMP3 显示出比 FRET 传感器 D3cpV 和 TN-XXL 更高的光稳定性，这可能是因为其暗态基线对光漂白的敏感性更低。 对于强度和 FRET 成像而言，钙结合时信号增加的 GECIs 更为可取，因为这减少了对诸如传感器光漂白、降解或硬件错误等潜在伪影的误判。
荧光能量共振转移（FRET）の効率計算方法についての詳細な解説。 FRET (荧光共振能量转移)供体荧光蓝移与受体荧光红移的原因是由于供体和受体的荧光发射波长不同，当二者靠近时会发生能量转移。具体来说： FRET供体荧光蓝移：当供体和受体靠近时，受体会吸收供体的荧光能量并将其激发到更高的能级，导致受体的荧光发射波长向长波方向移动，即红移。同时. FRET，Dexter的EET，形成聚集体（Excimer，Exciplex的）都是EET，化学反应和ET之间有些可以甄别和混淆的概念，别的都很清楚了。 楼下赵冷说的“激发光的长时间照射是荧光淬灭的最常见原因：”那不是猝灭，那是漂白，是“Bleaching”。 可以是永久的，也可以是暂时的。
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